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醋柳總黃酮防治冠心病藥理基礎(chǔ)研究

黃良月   劉常伍   范維衡
張白嘉   楊亞斯   雷玉蘭
（四川省中藥研究所藥理室）
張尊儀   楊正菀
（華西醫(yī)科大學(xué)藥理教研室）

    提要: 醋柳總黃酮對動物在大劑量（400mg/kg）一次性灌胃、連續(xù)3-7日小量用藥（100-200mg/kg/d）或腹瀉給藥（400mg/kg）時均可增加心肌營養(yǎng)血流量，降低心肌耗氧量，提高動物耐缺氧的能力，對抗垂體后葉素所致的急性缺血性心肌損傷。此外，本品還能降低血清膽固醇，抑制血小板聚集，這些藥理作用可能是本品臨床上治療冠心病有較好療效的藥理基礎(chǔ)。醋柳總黃酮的毒性實驗表明，本品無明顯毒性，也沒有致畸和突變作用，是一種安全而有效的藥物。

    關(guān)鍵詞: 醋柳總黃酮    冠心病    心肌耗氧量    抑制血小板聚集

    醋柳（Cu-Liu）又名沙棘，屬胡頹子科（Elaegnaceae），學(xué)名Hippophae rhamnoidesL.，其果實中含有多種黃酮類化合物，如懈皮素、異鼠李素等。還含有大量維生素C及P。治療高脂血癥、心律紊亂、心絞痛和冠心病等，有一定療效^[1][2]。為此，我們對醋柳總黃酮防治冠心病的藥理基礎(chǔ)進行了探討。

實驗部分

一、材料

    醋柳總黃酮（Cu-Liu flavonoid）：為黃色或黃綠色粉末，由華西醫(yī)科大學(xué)研究所提供，用生理鹽水配成一定濃度的混懸液備用。
醋柳總黃酮注射液用0.4%的土溫-80液配成含醋柳總黃酮0.1%的溶液備用。
氯化⁸⁶ 銣購自中國科學(xué)院原子研究所，用時以生理鹽水稀釋成所需濃度。
小鼠、大鼠及犬由四川省中藥研究所和華西醫(yī)科大學(xué)動物飼養(yǎng)室供給。

二、方法與結(jié)果

（一）   對小鼠心肌營養(yǎng)性血流量的影響^[3]
    用體重18-22G的健康小鼠，雌雄各半，隨機分為給藥組和對照組。給藥組有
四組，給藥情況見表1。于腹腔注射給藥后半小時，或末次灌胃給藥后一小時，由小鼠尾靜脈注射⁸⁶ 銣生理鹽水溶液0.1ML/只。30秒后斷頭處死，取心臟稱重并用FT-603^#型г閃爍探頭忽然GP-IB自動定標(biāo)器進行脈沖數(shù)。三次實驗的結(jié)果見表一。
由表1可見，各給藥組小鼠心肌對⁸⁶ 銣的攝取均有顯著的增加，表明醋柳總黃酮能顯著增加小鼠心肌營養(yǎng)性血流量。
（二）   對犬冠脈流量和心肌耗氧量的影響
1、 用體重7.0-14.2KG的犬10只，靜注戊巴比妥30MG/KG麻醉后，做氣管插管安裝呼吸機，記錄頸總動脈血壓以及心率。插入胃管以備灌胃給藥。作右側(cè)開胸術(shù)，靜注肝素50MG/KG抗凝。仿KaBeP_HHa法冠竇狀插管測定冠狀竇流出量作為冠狀流量^[4]。每間隔15分鐘記錄10秒鐘冠狀竇流出量的ML數(shù)、血壓和心率。當(dāng)血流量、血壓和心率穩(wěn)定后，用醋柳總黃酮混懸液400MG/KG或生理鹽水灌胃，灌胃后15、30、45、60、75和90分鐘，分別字頸總動脈、冠狀竇取血，用舒勞氏微量血氧分析器測定頸總動脈、冠狀竇靜脈血氧含量，計算出動靜脈血氧差，實驗終止時，從冠狀竇導(dǎo)管加壓注入0.5%伊文思蘭溶液25ML。取下心臟，稱取全心及心肌蘭區(qū)重量，計算出每分鐘每100克心肌冠脈流量。再按動靜脈血氧差求得不同取血時間的心肌耗氧量。結(jié)果見表二。

表一  醋柳總黃酮對小鼠心肌營養(yǎng)性血流量的影響

Table.The influence of Cu-Liu on zhe myocaxdial nutient blood floe in mice

  * P < 0.05 Compared with values before administration         ** P < 0.01

表2 醋柳總黃酮對麻醉犬心率、血壓、冠狀流量及心肌耗氧量均值標(biāo)準(zhǔn)誤的影響

Tab2.The influence of Cu-Liu flavonoid on the heait rate,blood pressure,coronary blood flow,myocardial oxygen comsumption(means±S)in anesthetized doys

* P < 0.05compared with values before administration

由表2可見，灌胃給予生理鹽水后，冠脈流量、血壓和心率以及心肌耗氧量無明顯變化。給醋柳總黃酮后90、60分鐘，血壓、心率、冠脈流量均稍有降低，無統(tǒng)計學(xué)意義。但心肌耗氧量于給藥后60 分鐘時顯著減少（P〈0.05），表明醋柳總黃酮能降低麻醉狗心肌耗氧量。

2、用體重12KG以上犬只，用電磁流量計探頭于左旋支，用西德Hellige多導(dǎo)生理儀記錄其流量及心電、心率、頸動脈壓力等，紙速為30mm/sec，肝素化后，經(jīng)頸靜脈行冠狀竇插管，于給藥前和給藥后5、15、30分鐘測定上述指標(biāo)，并抽取冠狀竇及動脈血液，用丹麥產(chǎn)ABL₂型血氣分析儀測定血氧含量。同土溫-80（醋柳總黃酮助溶劑）作對照性觀察。結(jié)果使用醋柳總黃酮溶液（含醋柳總黃酮0.1%，土溫0.4%）1mg/kg后各觀察指標(biāo)的變化與0.4%土溫-80相比未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學(xué)差異。

（三）對大鼠急性心肌缺血的保護作用

    選用體重200-250G雄性大鼠90只，隨機分為給藥組和對照組。給藥組分為二組，對照組也分為陽性及陰性對照，實驗條件見表三。腹腔注射藥物后半小時及未次口服給藥后1小時，將清醒大鼠仰臥位固定，記錄胸前導(dǎo)聯(lián)的正常心電圖。然后靜注垂體后葉素0.5單位/KG，10秒鐘內(nèi)注完，注射后10、20、30、40、50、60、90秒和2分鐘后各記錄一次心電圖。以給垂體后葉素后30 秒內(nèi)S-T段升高1MM以上或兩分鐘內(nèi)T波降50%以上或倒置作為心肌缺血的指標(biāo)^[6] ，以不出現(xiàn)心肌缺血動物數(shù)與所以總動物之比表示心肌缺血陰性率。用藥組與對照組比較，進行X²檢驗，結(jié)果見表3

表3 醋柳總黃酮對大鼠急性心肌缺血的保護作用

Tab.3.The prophylact:c of Cu-LiuFlavonoid on acute myocardial ischemia rats

* P < 0.5 Compared with values before administration ** p < 0.01

從表3可見，給予醋柳總黃酮各組均顯示對垂體后葉素所致的心肌缺血有非常顯著保護作用（P〈0.01〉

（四）對小鼠缺氧耐力的影響

1、對小鼠常壓缺氧情況下生存時間的影響^[6]。

按常規(guī)方法測定，醋柳總黃酮組及對照組每只小鼠在缺氧條件下的生存時間，算出兩批實驗的各組平均值，并進行比較，結(jié)果見 表4

表4  醋柳總黃酮對小鼠常壓缺氧情況下生存時間的影響

Tab4.The influence of Cu-Liu Flavonoid on survrval time of mice under situation with normal pressure and hypoxia

* P < 0.01

由表4可知、由表四可見，小鼠腹腔注射醋柳總黃酮400mg/kg，能明顯延長在常壓下缺氧情況下的生存時間。

2、對小鼠低壓缺氧情況下生存率的影響。低氧缺氧實驗裝置，仿醫(yī)科院藥物所設(shè)計[5]。按常規(guī)方法測定給藥組及對照組小鼠的死亡數(shù)和存活數(shù)，連續(xù)進行5-6次實驗，累積兩組小鼠的死亡數(shù)和存活數(shù)，以X2統(tǒng)計，本實驗同時以腹腔注射心得安20MG/KG作平行性陽性對照觀察。將五次實驗數(shù)據(jù)的均值列入表5。

表5  醋柳總黃酮對小鼠低壓缺氧情況下生存綠的影響

Tab.5 The influencc Cu-Liu flavonoid on the survival of rate of mice under hypobanic and hypoxia sitiuation

P < 0.01 Compared with values before administration

表五結(jié)果表明，醋柳總黃酮400MG/KG一次腹腔注射，能顯著提高小鼠在低壓缺氧情況下的存活率，其作用與心得安大致相當(dāng)。

3、對給異丙腎上腺素小鼠的低壓缺氧生存時間的影響

按常規(guī)方法測定給藥組，異丙腎上腺素對照組和空白對照組小鼠在低壓缺氧條件下的生存時間。結(jié)果見表6

表6 醋柳總黃酮對給異丙腎上腺素小鼠的低壓缺氧生存時間的影響

Tab6.The influence of Cu-Liu Flavonoid on the survival time of mice being given isoprenaline under hypobaric and hypoxic situation

表6結(jié)果說明，腹腔注射醋柳總黃酮400MG/KG組較異丙腎上腺素對照組小鼠的生存時間有顯著的延長（P〈0.05），表明本品可使異丙腎上腺素的心肌耗氧量明顯減少。

（五）對大鼠體內(nèi)脂質(zhì)含量的影響

    用體重120~140G雄性大鼠25只，隨機分為正常對照組、高脂對照組和給藥組。除正常對照組給普通飼料外，其余均在普通飼料中加入膽固醇、膽酸、甲基硫氧嘧啶、豬油（2：0.1：0.05：5）組成高脂飼料。在給高脂飼料的同時，給藥組每日灌胃醋柳總黃酮100MG/KG或200MG/KG一次，正常對照組和高脂對照組給藥助溶劑（土溫-80）一次，連續(xù)40天后，取血測定血小板聚集抑制率、血清TC

TG、HDL-CH；另取肝臟和主動脈分別提取測定TG和TC 。結(jié)果見表7。

表7  醋柳總黃酮對大鼠體內(nèi)脂質(zhì)的影響

Tab.7 The influence of Cu-Liu Flavonoid on the lipiids in rate

() number of animals      * p < 0.05Compared with the high fat diet contral group

表7 結(jié)果表明：醋柳總黃酮100MG/KG，200MG/KG，連續(xù)40 天灌胃，對血清總膽固醇升高有明顯的預(yù)防作用。但對血清TG和肝臟、主動脈的脂質(zhì)無明顯影響，大劑量組對ADP導(dǎo)致的高脂動物的富血小班血漿中血小板聚集有一定抑制作用，抑制率為29.26%

（六）毒性實驗

1、  急性毒性實驗

醋柳總黃酮混懸液給小鼠一次灌胃，最大用藥量達40G/KG，及在一天之內(nèi)四次灌胃給藥，總劑量達60G/KG，均未發(fā)現(xiàn)到小鼠有任何不良反應(yīng)。

2、  亞急性毒性實驗

選用體重50-60G的大鼠48只，雌雄各半，隨機分為四組，給藥組以醋柳總黃酮100MG/KG，200MG/KG和400MG/KG每天分別灌胃一次，對照組每天灌服等體積對照液（含土溫-80）一次。給藥100天后，取血測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶活性、尿素氮、血象，同時測定心電圖，然后處死動物，行大體解剖觀察。實驗表明：各組間各指標(biāo)均無明顯差異。從而說明，醋柳總黃酮100MG/KG、200MG/KG和400MG/KG連續(xù)灌胃100天，未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用。

3、  顯性致死實驗

選用體重28-34G健康性成熟的雄性小鼠30只，隨機分為三組，醋柳總黃酮組每天灌服生理鹽水，每天一次，連續(xù)七天，于交配前24小時一次腹腔注射甲基磺酸乙脂400MG/KG作為陽性對照組。然后按照常規(guī)進行顯性致死實驗，算出顯性致死指數(shù)，本實驗結(jié)果表明，醋柳總黃酮組與空白對照組相同，未發(fā)現(xiàn)顯性致死作用，而陽性對照組注射甲基磺酸乙脂后顯示了明顯的陽性結(jié)果。

4、  致畸實驗

選用性成熟雌鼠與雄鼠按2：1同籠過夜，每天上午查陰道涂片。把有精子的雌鼠隨機分為對照組和給藥組，每組7只，于受孕后第6天至第15天，分別用生理鹽水和醋柳總黃酮400MG/KG灌胃，連續(xù)10天，于受孕后第20 天處死孕鼠，剖腹檢查著床數(shù)、活胎數(shù)、胎重量及死胎數(shù)，并對活胎數(shù)進行外觀檢查，1/2活胎進行內(nèi)臟檢查，1/2活胎制備骨骼標(biāo)本，檢查骨骼發(fā)育情況。結(jié)果，醋柳總黃酮對著床數(shù)、胎仔數(shù)、胎重量、外部形狀及內(nèi)臟發(fā)育、骨骼發(fā)育均無明顯影響。

小 結(jié)

    小鼠腹腔注射醋柳總黃酮400MG/KG一次或灌胃100MG/KG/日或200 MG/KG/日三天及七天。心肌營養(yǎng)性血流量明顯增加并明顯延長小鼠在常壓缺氧情況下的生存時間，提高小鼠在低壓缺氧情況下的存活率，對異丙腎上腺素增加心肌耗氧量也有明顯對抗作用。表明醋柳總黃酮有明顯的抗缺氧能力，同時，醋柳總黃酮對垂體后葉素所致的心肌缺血有保護作用；對血清總固醇的升高有降低作用；對高脂動物的富血小板血漿聚集有一定的抑制作用。

    綜上所述醋柳總黃酮可呈現(xiàn)多方面有利于冠心病治療的藥理活性。加以醋柳總黃酮的急性和亞急性毒性實驗和致突變及致畸實驗的陰性結(jié)果，提示醋柳總黃酮在臨床上治療冠心病的高度安全性和有效性是具有多方面藥理學(xué)依據(jù)的。

參考文獻

1、 華西醫(yī)科大學(xué).心血管疾病資料匯編1978；1，98~103.
2、 華西醫(yī)科大學(xué).心血管疾病治療匯編1978；1，94~97.
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6、 中國藥理學(xué)會編：《藥理學(xué)進展》（心血管藥理分冊）1980：257~258，人民衛(wèi)生出版社.