杭州市第六人民醫(yī)院

施軍平 過建春

 

摘  要：目的：觀察當(dāng)飛利肝寧膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠肝纖維化的影響。方法：利用40%四氯化碳花生油給予大鼠肝皮下注射誘導(dǎo)肝纖維化。用當(dāng)飛利肝寧膠囊進(jìn)行干預(yù)，并以復(fù)方鱉甲軟肝片作陽性對(duì)照，分別在三周末及六周末取血，測量肝功能、肝纖維化相關(guān)指標(biāo)，并取肝臟通過光鏡觀察肝組織病理變化。結(jié)果：當(dāng)飛利肝寧膠囊組和復(fù)方鱉甲軟肝片組大鼠在三周、六周肝功能均有明顯改善，但當(dāng)飛利肝寧組較復(fù)方鱉甲軟肝片更為明顯（P<0.05）；血清HA、PC-III、LN值明顯低于模型組，有顯著性差異（P<0.05）；兩組肝纖維化程度均好于模型組（P<0.05，P<0.01）。提示：當(dāng)飛利肝寧膠囊和復(fù)方鱉甲軟肝片有良好的抗肝纖維化效果，其中當(dāng)飛利肝寧膠囊有顯著改善肝功能、降低肝纖維化相關(guān)指標(biāo)的作用。

主題詞：肝硬化/中醫(yī)藥療法  復(fù)方（中藥）/治療應(yīng)用  大鼠

 

    當(dāng)飛利肝寧膠囊的主要成分為當(dāng)藥和水飛薊，具有清熱解毒，利膽化濕作用。近年來，國內(nèi)陸續(xù)有應(yīng)用該藥治療各種急、慢性肝病的報(bào)道，但對(duì)其抗肝纖維化作用及其機(jī)制進(jìn)行研究不多。為此，我們進(jìn)行當(dāng)飛利肝寧膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠肝纖維化影響的研究，并與復(fù)方鱉甲軟肝片作比較�，F(xiàn)報(bào)道如下：

1  實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 藥物  當(dāng)飛利肝寧膠囊原粉，由四川美大康藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：030215，每膠囊含生藥為1.0g；復(fù)方鱉甲軟肝片，由中國人民解放軍三0二醫(yī)院研制，內(nèi)蒙古集寧制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：20030409，實(shí)驗(yàn)時(shí)均以蒸餾水配制至所需濃度。

1.2 動(dòng)物和試劑  Wistar大鼠48只，體重180~210g，雌雄各半，由浙江中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（ALT），天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（AST），總蛋白（TP），白蛋白（ALB），均由英國Randox公司提供；III型前膠原（PCIII）放層粘蛋白（LN）、透明質(zhì)酸（HA）放射免疫分析測定盒，均由上海海軍醫(yī)學(xué)研究所生物技術(shù)中心提供；CCL4（分析純），蘇州市第二化工廠研究所。

1.3 方法

1.3.1  分組、用藥及模型復(fù)制方法：48只大鼠隨機(jī)分為4組，分別為當(dāng)飛利肝寧膠囊組，復(fù)方鱉甲軟肝片組，模型組和正常組，每組12只。參照沈志云等^[1]方法對(duì)前三組進(jìn)行模型復(fù)制；第一天皮下注射40%CCL4花生油0.5ml/100g，以后每次0.3ml/100g，每周兩次，各組在造模同時(shí)灌胃給藥，每日一次。當(dāng)飛利肝寧膠囊組：給當(dāng)飛利肝寧膠囊每日1.5ml/100g，復(fù)方鱉甲軟肝片組：給復(fù)方鱉甲軟肝片每日1.5ml/100g(兩組藥量均相當(dāng)于成人每日每公斤藥量的10倍)，模型組與正常組每日按1.5ml/100g灌以蒸餾水，整個(gè)實(shí)驗(yàn)持續(xù)43天，各組分別在3周結(jié)束，6周結(jié)束時(shí)隨機(jī)處死6只大鼠，分別取血及肝組織。

1.3.2  檢測方法：大鼠摘眼球法取血，分離血清，ALT、AST、TP、ALB采用全自動(dòng)生化分析儀檢測。采用放免法檢測血清透明質(zhì)酸（HA），層粘連蛋白（LN），III型前膠原（PC-III）的含量。

1.3.3  肝臟組織病理學(xué)切片每次在肝左葉相同部位上取相同大小肝細(xì)胞固定于10%甲醛石蠟包埋切片，行HE及Masson’s染色，光鏡觀察。肝臟纖維化的分期（S），肝臟炎癥程度的分級(jí)（G）均參照“1995年北京病毒性肝防治方案”中病理標(biāo)準(zhǔn)^[2]，由同一病理科醫(yī)師在相同環(huán)境中進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。

 

2  結(jié)果

2.1  大鼠一般情況：正常對(duì)照組大鼠，在36天死亡一只。模型組第32天死亡一只，各組體重均持續(xù)增加。模型組動(dòng)物較另外3組瘦弱，皮毛無光澤，倦怠，精神不振，激惹后煩躁易怒。

2.2  對(duì)大鼠AST、ALT、TP、ALB的影響（見表1）

多次給予CCL4花生油造成大鼠肝纖維化模型后，可引起大鼠ALT和AST升高，TP和ALB降低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組比較，6周時(shí)當(dāng)飛利肝寧膠囊和復(fù)方鱉甲軟肝片組均能不同程度降低大鼠ALT和AST，提高TP和ALB含量（P<0.01，P<0.05），當(dāng)飛利肝寧組大鼠ALT和AST下降較復(fù)方鱉甲軟肝片組明顯，P<0.05；而兩組TP和ALB含量比較，無明顯差異，P>0.05。

 

表1    各組血清AST、ALT、TP、ALB水平比較（ ±S）

組別	n	ALT(U/L)	AST(U/L)	TP(g/l)	ALB(g/l)
正常組(第六周)	5	48.21±10.62	54.72±15.53	79.73±10.14	37.14±7.43
模型組(第六周)	5	458.04±110.35	330.05±98.81	57.01±14.63	27.04±4.91
當(dāng)飛利肝寧組(第六周)	6	132.43±39.52★△	117.71±49.95★△	65.70±6.62#▲	33.52±3.81#▲
復(fù)方鱉甲軟肝片組(第六周)	6	254.54±86.40★	202.80±70.20★	64.40±5.11▲	32.20±4.21▲

注：同模型組相比：★P<0.01，P<0.05；同復(fù)方鱉甲軟肝片組比較：#P>0.05，△P<0.05

 

2.3  對(duì)大鼠血清HA、LN、PC-III的影響（見表2）

   3周時(shí)與正常組、當(dāng)飛利肝寧膠囊組和復(fù)方鱉甲軟肝片組相比，模型組血清HA、PC-III升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01，P<0.05）；LN升高，但統(tǒng)計(jì)學(xué)上無差異（P>0.05）。6周時(shí)同正常組、當(dāng)飛利肝寧膠囊組和復(fù)方鱉甲軟肝片組相比，模型組HA、LN、PC-III升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.001,P<0.01,P<0.05）。3周時(shí)和6周時(shí)當(dāng)飛利肝寧組和復(fù)方鱉甲軟肝片組相比，血清HA、LN、PC-III水平無顯著差異（P>0.05）。

 

表2    各組血清HA、LN、PC-III含量變化的比較（ ±S）

 

組別	n	HA(ng/ml)	LN(ng/ml)	PC-III(ng/ml)
正常組(第三周)	6	167.97±73.65	17.37±5.87	15.23±8.31
模型組(第三周)	6	349.14±82.66	24.45±8.69	32.77±8.33
當(dāng)飛利肝寧組(第三周)	6	196.83±78.32★▲	20.07±6.12#▲	16.35±7.18★▲
復(fù)方鱉甲軟肝片組(第三周)	6	207.68±80.12★▲	22.47±7.52#▲	17.98±7.06★▲
正常組(第六周)	5	204.10±69.24	19.61±60.18	5.62±6.57
模型組(第六周)	5	537.17±195.04	39.95±14.23	36.22±15.09
當(dāng)飛利肝寧組(第六周)	6	295.12±82.56★▲	21.29±7.10★▲	17.19±7.79★▲
復(fù)方鱉甲軟肝片組(第六周)	6	304.35±76.62★▲	27.57±7.89★▲	21.19±8.45★▲

 

注：同復(fù)方鱉甲軟肝片組比較：▲P>0.05；同模型組比較：★P<0.01，#P>0.05。

2.4  肝組織病理變化的影響（見表3）

    正常對(duì)照組：肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，未見在脂肪變、腫脹、纖維組織增生等明顯的病理組織學(xué)的改變。模型對(duì)照組：大部分肝組織間質(zhì)有不同程度的纖維組織增生，以匯管區(qū)為中心，隨后延伸到小葉區(qū)，小葉結(jié)構(gòu)紊亂，形成大小不等的假小葉，假小葉主要在匯管區(qū)與小葉中央?yún)^(qū)之間形成；肝組織間質(zhì)含有多量脂肪細(xì)胞堆積，因大小不等的脂肪顆粒沉積使腫大的肝細(xì)胞壓迫肝竇，肝竇變窄，纖維組織中間見有炎癥細(xì)胞（主要是淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞及嗜酸性細(xì)胞）浸潤，并有肉芽腫形成；肝細(xì)胞和匯管區(qū)的分界不清，同時(shí)伴有肝細(xì)胞碎片壞死。與模型對(duì)照組比較，當(dāng)飛利肝寧膠囊組和復(fù)方鱉甲軟肝片組大鼠肝組織病理損傷程度明顯輕于模型對(duì)照組。

 

表3     各組肝纖維化程度及積分的比較

組別	n	S0	S1	S2	S3	S4
正常組(第三周)	6	6	0	0	0	0
模型組(第三周)	6	1	1	2	2	0
當(dāng)飛利肝寧組(第三周)	6	5	1	0	0	0
復(fù)方鱉甲軟肝片組(第三周)	6	4	2	0	0	0
正常組(第六周)	5	5	0	0	0	0
模型組(第六周)	5	0	0	0	2	3
當(dāng)飛利肝寧組(第六周)	6	3	3	0	0	0
復(fù)方鱉甲軟肝片組(第六周)	6	2	3	1	0	0

 

3  討論

    肝臟是機(jī)體重要代謝器官，當(dāng)肝功能損傷時(shí)則代謝障礙，并影響其他臟功能，嚴(yán)重

者危及生命。肝纖維化是慢性肝病的病理基礎(chǔ)，肝硬變則是各種肝病經(jīng)久不愈的結(jié)局。因而，阻斷肝纖維化的發(fā)生發(fā)展在肝病的治療中有重大意義。祖國醫(yī)學(xué)中無肝纖維化一詞，根據(jù)其癥狀多屬于中醫(yī)“脅痛”，“積聚”等范疇，其病因病機(jī)為正氣不足“濕熱毒邪”“疫毒”等侵襲機(jī)體，留聚肝臟不散，阻滯氣機(jī)，氣滯血淤，脈絡(luò)壅塞或聚濕成痰或血淤成積，病程長纏綿難愈。宛淑芳等人^[3]認(rèn)為“濕熱疫毒”是肝纖維化的啟動(dòng)因素，結(jié)締組織增生與變性是淤血的內(nèi)容之一，因而本實(shí)驗(yàn)根據(jù)中醫(yī)上述認(rèn)識(shí)設(shè)立具有清熱解毒，利膽化濕的當(dāng)飛利肝寧膠囊組和具有扶正化淤的復(fù)方鱉甲軟肝片組，干預(yù)CCL4所致大鼠肝纖維化形成，其結(jié)果表明：3周、6周，當(dāng)飛利肝寧膠囊組，復(fù)方鱉甲軟肝片肝功能指標(biāo)和血清HA、LN、PC-III值明顯低于模型組，有顯著性差異(P<0.05)，結(jié)合3周、6周模型組組織病理變化的情況，肝細(xì)胞脂肪變性顆粒變性由輕變重，肝細(xì)胞壞死，膠原纖維由少到多，纖維隔離的形成，以及肝小葉結(jié)構(gòu)的逐漸紊亂，說明當(dāng)飛利肝寧膠囊組，復(fù)方癟甲軟肝片均對(duì)CCL4所致大鼠肝纖維化有干預(yù)作用并延緩了肝纖維化的形成。當(dāng)飛利肝寧膠囊組的復(fù)方鱉甲軟肝片組3周、6周血清HA、LN、PC-III值以及組織病理變化對(duì)比均無顯著性差異（P>0.05）說明當(dāng)飛利肝寧膠囊組在對(duì)大鼠肝纖維化的干預(yù)方面與復(fù)方鱉甲軟肝片組具有同樣的效果，治則用藥不同而有同樣的效果，其原因可能是在肝纖維化形成過程中二者進(jìn)行了不同層次和方面的干預(yù)。但在肝功能的改善方面當(dāng)飛利肝寧膠囊組優(yōu)于復(fù)方鱉甲軟肝片，提示其抗肝纖維化作用是通過抗肝損傷，保護(hù)肝細(xì)胞、促進(jìn)肝功能恢復(fù)，抑制膠原纖維合成、促進(jìn)其降解而發(fā)揮的。

 

參考文獻(xiàn)

1   沈吉云，燕忠生，趙淑媛。軟肝合劑對(duì)慢性實(shí)驗(yàn)性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)理。中華實(shí)用

中西醫(yī)雜志。1999；12 （20）：1346

2   病毒性肝炎防治方案（試行）（1995年5月北京第五次全國傳染病寄生蟲病學(xué)術(shù)會(huì)議討論

修訂）。中華內(nèi)科雜志。

3   宛淑方，張俊富�？估w軟肝沖劑抗肝纖維化的臨床研究。中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，1999；9（4）：33