張力群   謝娟^※  蔡昌化^Δ

 

摘  要

目的 在篩選抗急慢性肝炎的新藥動物實(shí)驗(yàn)中，以” 當(dāng)飛利肝寧膠囊”為對照藥，觀察其抗炎，退黃的機(jī)理。方法采用經(jīng)典的大鼠足跖注射角叉菜膠所至炎性腫脹，大鼠皮下棉球肉芽腫增生，大鼠羧甲基纖維素囊中白細(xì)胞游出，二甲苯所至小鼠耳廓腫脹及耳毛細(xì)血管通透性增高，小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加進(jìn)行抗炎，抗?jié)B出實(shí)驗(yàn)。ANZT大白鼠黃疸肝炎模型觀察了”當(dāng)飛利肝寧膠囊”清熱解毒，活血化瘀的抗肝炎退黃效果。結(jié)果  “當(dāng)飛利肝寧膠囊”對大鼠足跖注射角叉菜膠引起的炎性腫脹有明顯抑制作用（P<0.001），對大鼠棉球肉芽腫的形成有顯著的抑制作用（P<0.01），可使大鼠CMC囊中白細(xì)胞游出明顯減少（P<0.001），明顯抑制二甲苯所至耳廓腫脹的作用（P<0.05）及耳毛細(xì)血管通透性增高（P<0.001），明顯抑制醋酸所至小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加（P<0.05），對ANZT致大鼠黃疸肝炎的退黃效果（P<0.01）。結(jié)論 “當(dāng)飛利肝寧膠囊”對急性炎癥具有抗炎作用，可能對炎癥的多個環(huán)節(jié)如體內(nèi)的炎性介質(zhì)釋放，毛細(xì)血管通透性的增加，組織水腫脹及炎性滲出，以及炎癥增殖期的肉芽組織增生均有抑制作用。對ANZT致大鼠黃疸肝炎的退黃效果表明： “當(dāng)飛利肝寧膠囊”具有清熱解毒和活血化瘀的雙重藥效。清熱解毒是中醫(yī)治療急性感染性疾病的主要治法，由于感染，特別是局部感染發(fā)展到一定階段常伴有血瘀證候。此時配伍活血化瘀法，�？纱鬄樘岣忒熜А＿@為當(dāng)飛利肝寧膠囊用于慢性肝炎抗纖維化臨床提供了藥理依據(jù)。

主題詞  抗炎癥滲出  黃疸性肝炎  清熱解毒  活血化瘀  “當(dāng)飛利肝寧膠囊”

雙重藥效

四川美大康藥業(yè)股份有限公司的當(dāng)飛利肝寧膠囊以當(dāng)藥及水飛薊為有效成分，有減輕肝細(xì)胞變性、抑制肝細(xì)胞炎癥，穩(wěn)定肝細(xì)胞膜的作用；在臨床上表現(xiàn)為溫和、平穩(wěn)降低轉(zhuǎn)氨酶且不易反彈的特點(diǎn)。鑒于水飛薊降酶抗肝炎的效果早有定論，而抗慢性肝纖維化的效果與藥物中有效成分及抗炎退黃效果有關(guān)。我們在篩選抗黃疸性肝炎藥時，以“當(dāng)飛利肝寧膠囊”為對照藥進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)將有關(guān)該藥抗炎，退黃的觀察結(jié)果報告如下。

1 材料

1.1動物：昆明種小鼠，ICR小鼠，wistdv大鼠，SD大鼠均由云南省實(shí)驗(yàn)動物中心提供。

1.2藥物與試劑：“當(dāng)飛利肝寧膠囊”、 實(shí)驗(yàn)前以蒸餾水配制成不同濃度的溶液，最后選定相當(dāng)于臨床用量50倍的劑量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。a一萘異硫氟酸酯（ANZT）用其麻油溶液。其它藥物試劑配制方法略。

2 方法與結(jié)果

2.1抗炎作用

2.1.1 對大鼠足跖注射角叉菜膠所致炎性腫脹的影響：取體重160克——180克雄性大鼠30只，隨機(jī)分成3組，每組10只，分別為空白對照組，“當(dāng)飛利肝寧膠囊”組和布洛芬陽性對照組，均OP給藥。給藥后1h，大鼠右后跖sc1%角叉菜0.1ml致炎。用大鼠足爪容積測定儀測定致炎前后不同時間大鼠足爪容積變化，每小時1次，連續(xù)5次。以致炎前后足爪容積的差值作為腫脹度。結(jié)果表明，“當(dāng)飛利肝寧膠囊”20mg/kg，對大鼠足跖注射角叉菜膠引起的炎性腫脹均有明顯抑制作用，與空白對照組比較有顯著差異（P<0.001）。見表1

 

表1   對大鼠足跖注射角叉菜膠所致炎性腫脹的影響

劑量	動物數(shù)	致炎后不同時間腫脹度（ml,x±SD）
藥物	（mg/kg ）	（只） 1h		2h		3h		4h
生理鹽水	10.0	10	0.38±0.10		0.49±0.21		0.51±0.20		0.48±0.16
當(dāng)飛利肝寧膠囊	20.0	10	0.05±0.04***		0.08±0.07***		0.25±0.22*		0.37±0.10
布洛芬	0.1(g)	10	0.10±0.06***		0.16±0.06***		0.24±0.08**		0.28±0.09**

t檢驗(yàn) 與生理水比較，^*P<0.05，^**P<0.001，^***P<0.001。

2.1.2 對大鼠棉球肉芽腫的影響：取Vvistar種大鼠30只，雌雄各半，體重160g±20g，分組及劑量同上。將動物i.p戌巴比妥鈉（30mg/kg）麻醉后，仰臥固定于鼠板上，在無菌操作下，下腹部稍加剝離皮下組織，用眼科鑷將20mg重滅菌棉球2只植入腹部皮下，隨即縫合皮膚。術(shù)后次日灌胃給藥一次，連續(xù)用藥7d。經(jīng)8天動物脫頸椎致死后，打開切口，將棉球連同周圍結(jié)締組織一起剝出，剔除脂肪組織，置60℃烘干，稱重，將所得肉芽腫重量減去棉球重量，即肉芽腫凈重。計算每組動物肉芽腫毫克重/每百克體重均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，比較各組肉芽腫重量，計算抑制率，結(jié)果20mg/kg“當(dāng)飛利肝寧膠囊”組對大鼠棉球肉芽腫的形成有顯著的抑制作用，（P<0.01）見表2。

表2對大鼠棉球肉芽腫的影響（X±SD）

組	劑   量	例數(shù)	肉芽總重	抑制率
別	（mg/kg）	(N)	mg/100g體重	（%）
對照組	10.0	10	60.92±15.73
當(dāng)飛利肝寧膠囊	20.0	10	38.45±14.74**	40.74
百蕊片	0.24（g）	10	29.72±6.81**	52.97

與對照組相比：** P<0.01

 

2.1.3對大鼠羧甲基纖維素囊中白細(xì)胞游出的影響：SD大鼠30只，雌雄各半，體重160g—180g，隨機(jī)分成3組，每組10只。組別設(shè)置同上，均op給藥2次，間隔4h，于給藥前一天在無菌操作下向大鼠背部皮下注射入空氣5mI，形成一園形氣囊，給藥后1h用消毒針頭和注射器向囊內(nèi)注入1.5%CMC液5mI，于首次給藥后3h及7h吸取囊內(nèi)CMC液0.1m1，精確吸取0.01m1，稀釋劑0.5m1，滴于白細(xì)胞計數(shù)板上，計算白細(xì)胞數(shù)。結(jié)果20mg/kg“當(dāng)飛利肝寧膠囊”組可使CMC囊中白細(xì)胞游出明顯減少，與空白對照組比較有顯著差異（P <0.01）見表3。

表3對大鼠羧甲基纖維素囊中白細(xì)胞游出的影響

 

藥           劑 量        動物數(shù)    囊內(nèi)白細(xì)胞數(shù)（10/Lx±SD）

　　�。╩g/kg）     （只）

物                               3h              7h

生理鹽水      5.0      10         8.0±1.1         58.8±13.4

　　當(dāng)飛利肝寧膠囊 　20.0     10         3.3±2.0*       19.8±2.3*

布 洛 芬    0.1（g） 10         2.7±1.2*       13.2±6.4*

 

七檢驗(yàn)  與生理鹽水比較：P<0.001

2.1.4 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響：取昆明種小鼠30只，雌雄各半，體重18g—22g，隨機(jī)分成3組，每組10只。連續(xù)給藥5d，末次給藥1h后，每只小鼠左耳涂0.05 mI二甲苯致腫，右耳作正常對照，1h后處死小鼠，以左耳重量減去右耳重量為腫脹度，比較藥物的抗炎作用，結(jié)果20mg/kg”當(dāng)飛利肝寧膠囊”具有明顯的抑制二甲苯所致耳廓腫脹的作用，與對照組相比，有顯著性差異（P<0.05），見表4

表4  對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響（x±SD）

 

組   別      劑   量       例  數(shù)      腫 脹 率        抑  制  率

             （g/kg）        (N)         （%）            （%）

對 照 組      0.5 mI         10         0.88±0.47  

當(dāng)飛利肝寧膠囊 20.0          10         0.53±0.23^*          40.72

百 蕊 片      0.24          10         0.50±0.24^*          44.21

與對照組相比：*P<0.05

2.1.5 對二甲苯所致小鼠耳毛細(xì)血管通透性增高的影響：取雄性小鼠30只，體重26g—30g隨機(jī)分成3組，每組10只，分組及給藥同上。給藥后1h，小鼠經(jīng)尾靜脈注入0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水0.1ml/10g并迅速將0.04mI二甲苯涂于小鼠右耳前后兩面。20min后將小鼠處死，剪下右耳，用直徑9mm的打孔器于各耳相同部位打下園形耳片。剪碎耳片置于10.0mI丙酮一生理鹽水（7：3）提取液的有塞試管中，暗處放置，每日輕搖試管2-3次，3d后經(jīng)110X g離心10min，取上清液于590nm處測吸光度。以未泡皮膚之丙酮一生理鹽水提取液校零。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得各耳片染料量。結(jié)果表明：20mg/kg當(dāng)飛利肝寧膠囊組能明顯抑制二甲苯致小鼠耳毛細(xì)管通透性增高，與空白對照組比較有顯著差異（P<0.001）見表5。

 

表5對二甲苯致小鼠耳毛細(xì)血管通透性增高的影響

組          劑   量      動物數(shù)              耳片染料量

別          （ml/kg）       (只)               (M ·x±SD)

生理鹽水         20.0         10                    16.5±3.1

當(dāng)飛利肝寧膠囊 　20.0(mg)         10                    6.8 ±2.0*

布 洛 芬         0.1（g）     10                    4.8±2.3*

與對照組相比：*P<0.05

2.1.6 對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響：分組及劑量同上。給藥1h后，給各鼠iv0.5%伊文氏藍(lán)10ml/kg。注射后20min脫頸椎處死小鼠，以6ml生理鹽水分?jǐn)?shù)次洗滌腹腔，吸管吸出洗液，合并加生理鹽水至10ml，離心15min，取上清液用724-IP分光光度計（a=590nm）測定光密度A值。結(jié)果顯示：20mg/kg當(dāng)飛利肝寧膠囊組明顯抑制醋酸腹腔注射后所致的毛細(xì)血管通透性的增加，與對照組相比，具有顯著的差異性，（P<0.05）見表6。

表6對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響（x±SD）

 

組   別         劑    量        例   數(shù)          光 密 度

（mg/kg）         （N）             A值

對 照 組                              10            0.321±0.091

當(dāng)飛利肝寧膠囊 　　　　20.0             10             0.232±0.088^*

百 蕊 片             0.24（g）        10            0.277±0.087^*

與對照組相比： *P<0.05  

2.2 退黃作用

2.2.1 Wistar大白鼠，體重180g—220g，雌雄不拘，隨機(jī)分為生理鹽水對照組，ANZT中毒組，當(dāng)飛利肝寧膠囊治療組。ANZT中毒組和當(dāng)飛利肝寧膠囊治療組均先將75mg/kg的ANZT分別灌入大鼠胃內(nèi)，由于大鼠經(jīng)ANZT中毒后6小時肝細(xì)胞開始變性壞死，故選定12小時開始治療用當(dāng)飛利肝寧膠囊20mg/kg，ig，bid，連續(xù)給藥3天。而ANZT中毒組和生理鹽水對照組則補(bǔ)給等體積的生理鹽水。3組均于中毒72小時后一起經(jīng)股動脈切開放血，收集血樣于室溫下靜置4—6小時分離血清，用咖啡因法定量測定SB，見表7。

表7血清膽紅素含量的比較

組   別           動物數(shù)                    SB(mg%血清)

                  （只）                      x±SD

生理鹽水組          10                       0.46±0.29

ANZT組             10                       5.34±1.05        

當(dāng)飛利肝寧膠囊組            10                       3.43±1.54*    

 

*P<0.01  

結(jié)果表明，當(dāng)飛利肝寧膠囊治療組的血清膽紅素顯著低于ANZT中毒組（P<0.01）。治療后，血清膽紅素的含量由5.34mg降至3.43mg，平均下降36.2%。

3討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，”當(dāng)飛利肝寧膠囊“對急性炎癥具有抗炎作用，它能明顯抑制由角叉菜膠所致的大鼠足跖炎性腫脹，也能明顯抑制二甲苯致小鼠毛細(xì)血管通透性增高及大鼠羧甲基纖維素囊中白細(xì)胞游出。 這三項(xiàng)抗炎作用為該藥用于治療急性炎癥提供了藥理學(xué)依據(jù)。

實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，“當(dāng)飛利肝寧膠囊”可明顯抑制二甲苯所致耳廓腫脹作用，抑制大鼠棉球肉芽腫脹和醋酸腹腔注射后所致毛細(xì)血管通透性的增加。表明其對急慢性炎癥反應(yīng)均有顯著抑制能力，并有效抑制炎癥階段毛細(xì)血管的通透性，減輕滲出反應(yīng)。提示“當(dāng)飛利肝寧膠囊”可能對炎癥的多個環(huán)節(jié)如體內(nèi)的炎性介質(zhì)釋放，毛細(xì)血管通透性的增加，組織水腫脹，炎性滲出，以及炎癥增殖期的肉芽組織增生等均有抑制作用。

“當(dāng)飛利肝寧膠囊”退黃實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其顯著降低血清總膽紅素的含量，可能與其改善大鼠肝臟微循環(huán)，促進(jìn)肝細(xì)脆的再生與恢復(fù)有關(guān)。

很多中醫(yī)文獻(xiàn)及臨床觀察均指出活血化瘀可增強(qiáng)清熱解毒的治療效果。但兩者功效均具備的中成藥不多，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明“當(dāng)飛利肝寧膠囊”的這兩種功效在臨床應(yīng)用中的廣泛的有效價值。

 

 

參考文獻(xiàn)略

 

第一作者，張力群（云南省藥物研究所藥理室）高級工程師。

通訊地址：昆明市科醫(yī)路康宏小區(qū)39棟2單元402號（郵編：650106）